ABI7900熒光定量PCR儀

一、ABI7900熒光定量PCR儀是繼7700、5700型熒光定量PCR儀之后，ABI公司推出的高通量實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統。它是兼容96孔板和384孔板的熒光定量PCR儀，也是可選手工進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣的熒光定量PCR儀。7900HT型熒光定量PCR儀可滿(mǎn)足從中通量到高通量實(shí)驗的需求。  

二、ABI7900熒光定量PCR儀主要特點(diǎn):  

（1）高效平臺-7900HT系統是為支持高通量而構建的，光學(xué)系統經(jīng)優(yōu)化以適用于384孔板熒光信號的激活和實(shí)時(shí)檢測。  

（2）結果可靠-7900HT系統采用了與7700、5700相同的定量原理，利用Ct值（Ct定義為在基線(xiàn)上方產(chǎn)生可檢測到的統計學(xué)上顯著(zhù)的熒光發(fā)射的這一PCR循環(huán)）和起始拷貝數的對應關(guān)系，通過(guò)外標準曲線(xiàn)精確計算未知樣品的起始拷貝數。  

（3）高度重現性-7900HT系統的熒光檢測發(fā)生在PCR對數期的起始，因此反應管中各組分沒(méi)有任何限制反應因素，從而確保檢測結果都是精確并能重復的。  

（4）先進(jìn)的熒光檢測技術(shù)-RISM®7900HT熒光定量PCR系統在不降低速度、分辨率的情況下有效提高了產(chǎn)率，這是基于先進(jìn)的熒光檢測技術(shù)：一束激光掃描并激活384個(gè)孔的每一個(gè)孔里的熒光染料，熒光信號通過(guò)光柵分光，經(jīng)過(guò)分離的多色熒光同時(shí)到達CCD攝像機，實(shí)現多色熒光同時(shí)檢測。  

（5）自動(dòng)進(jìn)樣裝置-7900HT系統配備有自動(dòng)化配件可取得高效率。自動(dòng)化裝置可容納84塊384孔板，機械手臂可按一定順序將待測樣品板運送至主機內，配備的條形碼閱讀器（Barcodereader）可自動(dòng)識別進(jìn)入主機的樣品板編號，使你在任何時(shí)間可以在樣品行列中插入或替代樣品板。  

（6）多樣的化學(xué)試劑-7900HT型熒光定量PCR儀上可使用的化學(xué)試劑包括TaqMan熒光探針?lè )ê蚐YBRGreen熒光染料法。TaqMan探針?lè )ň哂懈叨鹊撵`敏度和特異性，適用于實(shí)時(shí)定量的多重反應或單核苷酸多態(tài)性分析（SNP）。SYBRGreen染料應用于目標鑒定（篩選測定）或者在只需用少數幾個(gè)反應的測定中為理想。  

（7）有效防污染-7900HT系統在PCR全過(guò)程中使用專(zhuān)門(mén)設計的和始終密閉的樣品管。在加入樣品和試劑后這些管子便立即封閉并在擴增和檢測過(guò)程中保持這種狀態(tài)，這樣就可以大大地減少污染的機會(huì )；此外，7900HT系統不存在PCR后處理，有效防止擴增產(chǎn)物對實(shí)驗環(huán)境的污染而造成的假陽(yáng)性。  

（8）多種定量方法-ABIPRISM®7900HT序列檢測系統軟件為基因表達提供一種定量化方法。定量是從一個(gè)標準曲線(xiàn)上直接測定目標（基因）的量。相對定量方法是通過(guò)與標定樣品相比較而計算未知樣品的量，不需要標準曲線(xiàn)。  

三、原理介紹：  

1.定量，為了測定未知樣品中的目標（基因）的數量，7900HT系統可用來(lái)測定樣品的CT，然后用一條標準曲線(xiàn)來(lái)測定起始的拷貝數。在標準曲線(xiàn)的繪制中，7900HT系統軟件首先用已知的起始拷貝數的幾種稀釋度計算它們的CT值。接著(zhù)，軟件使用測得的CT值對應于起始拷貝數的對數值作圖。至少在五個(gè)數量級范圍中兩者呈線(xiàn)性關(guān)系。  

2.相對定量，對于基因表達研究來(lái)說(shuō)，相對定量是理想的方法。這里不是應用標準曲線(xiàn)而是相對于標定樣品計算表達水平。用一個(gè)內源對照來(lái)標定樣品的量。這一方法與7900HT系統在一個(gè)多重反應中能同時(shí)對目標和內源對照進(jìn)行定量測定的能力相結合，可實(shí)現高效、高通量的基因表達研究。  

3.有效的SNP檢測手段，除實(shí)時(shí)定量測定以外，7900HT系統包括對于已知的單一核苷酸多態(tài)性（SNPS）作大規模篩選的軟件。在一對等位基因系統中，用對應于兩個(gè)等位基因的兩個(gè)TaqMan探針在同一個(gè)試管中做多重PCR反應。反應終止時(shí)所產(chǎn)生的熒光用7900HT系統進(jìn)行測定，實(shí)驗結果通過(guò)分析軟件迅速取得。  

四、儀器規格和技術(shù)指標:  

（1）系統組成，7900HT熒光定量PCR儀－384孔或96孔可更換式半導體控溫PCR儀，488nm長(cháng)壽氬離子激光器，X,Y雙軸同步熒光掃描頭。  

（2）光柵和CCD檢測裝置，自動(dòng)進(jìn)樣裝置，DELLGX270電腦，Windows2000操作系統，儀器控制，數據采集及結果分析軟件，PrimerExpress引物探針設計軟件。  

（3）大產(chǎn)率，實(shí)時(shí)定量檢測－5000樣品/天（標準模式），96樣品/35分鐘（快速模式），終點(diǎn)SNP分析－30000樣品/2.5小時(shí)。  

（4）裝機指標，以99.7%的置信度明確區分濃度差別兩倍（5000和10000拷貝）的樣品的定量結果試劑和消耗品。  

（5）完備的通用基本試劑盒和消耗品，十二萬(wàn)種TaqmanGeneExpressionAssays人、大鼠、小鼠基因組基因表達分析試劑盒，二百萬(wàn)種TaqmanValidatedSNPGenotypingAssays人、大鼠、小鼠基因組SNP檢測試劑盒。  

（6）Taqman低密度表達譜芯片，CustomAssays代客設計、合成引物探針?lè )?wù)。